I cannabinoidi prodotti dalle piante vengono trovati in forma acida. Quando si applica calore o luce UV, questi cannabinoidi perdono una molecola di CO2 e si trasformano nella propria forma neutra. Questo processo è chiamato decarbossilazione. Così, quando un campione di cannabis viene fumato o vaporizzato, una gran parte dei cannabinoidi sarà decarbossilata per effetto del calore e si trasformerà nella forma neutra. Tuttavia, se lo stesso campione viene ingerito, poiché non è stato applicato alcun calore, i cannabinoidi acidi manterranno il loro stato originale.
La cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) non impiega calore in nessuna fase dell'analisi e, di conseguenza, i campioni non vengono decarbossilati. Pertanto, quando si usa l'HPLC, se si deve quantificare il contenuto di cannabinoidi di qualsiasi materia vegetale o estratto, si possono ottenere tre diversi risultati di concentrazione:
- % of Δ9-THC, CBD e CBG
- % of THCA, CBDA e CBGA
- % of THC Totale, CBD Totale e CBG Totale
El THC Totale, CBD Totale e CBG Totale sono le quantità massime che si possono ottenere da questi cannabinoidi se il campione è correttamente (o completamente) decarbossilato.
La percentuale di THCTotale è la somma della percentuale di Δ9-THC, più la percentuale di THCA, moltiplicata per un fattore di conversione. Dato che questo fattore è un numero inferiore a 1, non ci meravigliamo se la percentuale di THC Totale è inferiore alla somma di Δ9-THC più THCA, indipendentemente dal fattore di conversione.
Sapendo che la reazione di decarbossilazione è la trasformazione di THCA in THC attraverso la perdita di una molecola di anidride carbonica (CO2), il fattore di conversione può essere ottenuto nel modo seguente:
Quando il THCA perde la molecola di CO2, si trasforma in THC, che è una molecola più piccola, quindi, una molecola meno pesante del THCA (il THCA pesa 358 grammi per mol, mentre il THC pesa 314 grammi per mol). Considerando tale perdita, avremo 358/314=0,877 molecole di THC per molecola di THCA, quindi, il modo corretto di calcolare la percentuale di THC Totale in HPLC è:
% of THC Totale = % of THC + (% of THCA x 0,877)
Lo stesso principio viene applicato al calcolo della percentuale di CBD Totale e CBG Totale. La formula per questi casi è:
% of CBD Total = % of CBD + (% of CBDA x 0,877)
% of CBG Total = % of CBG + (% of CBGA x 0,878)
Quando i campioni vengono analizzati con la gascromatografia (GC), non è necessario applicare questa equazione, perché durante l'analisi essi non sono esposti a temperature molto elevate. Quindi, si presume che la reazione di decarbossilazione avvenga interamente nell'iniettore. Nel metodo ufficiale del "Regolamento (EC) N° 1177/2000 del 31 maggio 2000", l'iniettore è a 300°C e la quantità iniettata è molto modesta. Pertanto, significa che la reazione di decarbossilazione avviene interamente.
Bisogna tener conto del fatto che la decarbossilazione di qualsiasi tipo di cannabis non è solitamente perfetta. Ciò si potrebbe verificare perché, o non è stato possibile convertire tutti gli acidi allo stato neutro, dal momento che si sono formati altri prodotti dal deterioramento, o anche a causa della parziale evaporazione dei cannabinoidi. Quindi, la quantità di cannabinoidi neutri che si otterrà se si effettua la decarbossilazione potrebbe essere leggermente inferiore ai valori ottenuti di THCTotale CBDTotale o CBG Totale, dato che questi valori esprimono la quantità massima ottenuta nel caso di decarbossilazione al 100%.
Alla luce di quanto detto, possiamo concludere che l'analisi con HPLC, senza una previa decarbossilazione dei campioni, è la tecnica più precisa per conoscere il contenuto di cannabinoidi nella cannabis, poiché i valori ottenuti saranno i valori reali del campion
Per ulteriori informazioni leggere: Analisi dei cannabinoidi